Le Brodifacoum est un anticoagulant 4-hydroxycoumarine, dont le mode d'action est similaire à celui de ses prédécesseurs historiques, le dicoumarol et la warfarine.
Le Brodifacoum inhibe l'enzyme vitamine K époxyde réductase , nécessaire à la reconstitution de la vitamine K dans son cycle à partir de la vitamine K-époxyde, de sorte que le brodifacoum diminue régulièrement le taux de vitamine K active dans le sang. La vitamine K est nécessaire à la synthèse de substances importantes, notamment la prothrombine, impliquée dans la coagulation du sang. De plus, le brodifacoum (comme les autres anticoagulants à des doses toxiques) augmente la perméabilité des capillaires sanguins; le plasma sanguin et le sang lui-même commencent à couler des plus petits vaisseaux sanguins.